球赛下注

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球赛下注使用方法和注意事项

发布时间: 2017-03-28  点击次数: 1248次
球赛下注在HRP的催化下发生化学反应而发光,可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
球赛下注是在普通的化学发光液基础之让改进而来,相对于普通发光液来说,灵敏度更高,检测下限更低,可达到pg级别的抗原,并且一抗和二抗的稀释度更高。

球赛下注使用方法:
1.使用合适的方法进行Western,直至用PBST洗涤二抗。
2.新鲜配制ECL工作液:试剂I和试剂II按1:1混合后,用双蒸水10倍稀释,混合后即为ECL工作液。须马上使用。
3.印迹膜蛋白面朝上,用ECL工作液均匀滴加至印迹膜室温孵育1-2分钟。ECL工作液使用量大约为0.125ml/cm2膜或根据个人实验习惯使用。
4.用平头镊夹住印迹膜,垂直置于吸水纸以吸去多余工作液。
5.快速将印迹膜置于二层保鲜膜之间,尽量赶尽气泡。
6.将印迹膜蛋白面朝上,放于X光胶片暗盒内。
7.在暗室内放入X光片,曝光,显影。
 
球赛下注注意事项:
1.ECL工作液配制过程中汲取试剂I和试剂II时务必跟换Tip头,工作液新鲜配制后马上使用,放置过久会影响灵敏度。
2.根据蛋白丰度不同曝光时间可能是数秒至数小时。
3.曝光时间过长会使背景加深,曝光不足会导致条带模糊。
4.如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。
5.应使用高质量保鲜膜。
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