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NC膜、PVDF膜、尼龙膜的应用及差别

发布时间: 2016-06-14  点击次数: 2538次

NC膜、PVDF膜、尼龙膜的应用及差别

硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜),NC膜在Northern Blot、Southern Blot、Western Blot中都需要用到,杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用,先将待测核酸结合到一定的固相支撑物上,再与液相中的标记探针进行杂交。固相支撑物常用硝酸纤维素膜。 

PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支撑物。PVDF膜是疏水性的,膜孔径有大有小,随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜,小于20000的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜使用是需预处理,用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团,使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度,是印迹法中的理想固相支撑物材料。 
尼龙膜是一种合成的长链聚酰胺薄膜,对核酸和蛋白质具有很强的结合能力,能代替硝酸纤维素薄膜用于分子印迹和杂交实验。 
NC膜、PVDF膜、尼龙膜的差别:尼龙膜是较理想的核酸固相支撑物,有多种类型;硝酸纤维素膜是目前应用zui广的一种固相支撑物,价格*;PVDF膜介于二者之间。 
1. 就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2,对于200bp的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。 
2. 就温度适应性而言:尼龙膜经烘烤或紫外线照射后,核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合DNA,结合不牢固;PVDF膜结合牢固,耐高温,特别适合于蛋白印迹。 
就韧性而言:尼龙膜较强;硝酸纤维素膜较脆,易破碎;PVDF膜较强。 3. 就重复性而言: 
⑴、尼龙膜可反复用于分子杂交,杂交后,探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。 
⑵、NC膜的使用也很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在无离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了;比如NC膜很容易封闭,也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间,不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途。因为经不起多次“折磨”。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。 
⑶、由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时使用较温和的Tween20,而且浓度不要超过0.3%(据说0.05%效果)。一般而言,NC膜越纯,其蛋白结合能力就越高,所以要增加WB的灵敏度和分辨率,提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。如果NC膜搀杂一些醋化纤维素这在前面已经提到,会影响蛋白质结合 
⑷、与硝酸纤维素膜相比,PVDF膜在蛋白质截留能力,机械强度和化学相容性上都更优越的性能。市售硝酸纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍!)。但是PVDF膜zui大的优点不仅于此:更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择;而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的,特别是需要做N端蛋白测序,在相当“严酷”的清洗条件下,当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色,所以PVDF也是要做蛋白测序的*选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡,才能用。

产品货号价格
N+尼龙膜 现货RPN303B80
密理博PVDF膜15cm*13.5cm 0.22u 现货ISEQ0001065
密理博PVDF膜15cm*13.5cm 0.45u 现货IPVH0001060
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