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总RNA提取试剂盒

总RNA提取试剂盒

简要描述:货  号:R0002
名  称:总RNA提取试剂盒
规  格:50T/100T
价  格:360.00/640.00

产品型号:

所属分类:其他自产即用试剂

更新时间:2016-12-21

厂商性质:经销商

详情先容

总RNA提取试剂

试剂盒组成

50T

100T

保存温度

裂解液

50ml

100ml

2-8

漂洗液(RNase free)

15ml

15ml×2

2-8

玻璃奶

2.5ml

5ml

2-8

洗脱缓冲液(RNase free)

10ml

10ml

2-8

原理概况
本试剂以本企业所产总RNA提取试剂(TRIzol)为基础,结合玻璃奶核酸吸附技术,使zui终提取的RNA试剂纯度更高。

注意事项
1 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。
2 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3 所有离心步骤用低温离心机在4℃条件下离心,如果实验室没有低温离心机,也可以使用常温离心机,但所提得的RNA可能会降解严重些。
 

操作步骤
准备工作:使用前请先开启一瓶新的无水乙醇,倒入漂洗液中,倒满至离瓶口约0.5-1ml,盖上瓶口,摇匀。
1样品处理:
a,植物组织:以叶片RNA提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨,随后把研磨后的粉末迅速加入到裂解液中。大约50-100mg叶片使用1ml 裂解液。
b,动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例。取新鲜或-70冻存组织,大约10-30mg组织加1ml裂解液,用一次性组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
a,单层培养细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每10cm2面积加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
c,细胞悬液:离心收集细胞。每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液。
d,血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置2分钟,8,000-10,000rpm 离心1分钟。彻底吸弃上清,收集白细胞沉淀。每200 ul血液收集的白细胞沉淀加入1 ml裂解液。
2混匀,将匀浆样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
3向匀浆样品中加0.2ml氯fang,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟,使其自然分相。如不能旋涡混匀,可手动颠倒混匀2分钟代替。
42-8 12,000 rpm离心10分钟。样品会分成两层,RNA主要在上层的水相中,把水相(通常为500μl)转移到新DEPC处理管中。如果上清还有沉淀,可再次离心。
5.玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶,混匀,室温放置2分钟,10000转/分钟离心1分钟,去上清;沉淀加入800ul漂洗液,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,再用600ul漂洗液洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
7.室温放置10分钟,加入50100ul洗脱缓冲液混匀溶解,静置5分钟。离心,取上清为所提RNA。
8.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。



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