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质粒DNA提取试剂盒

质粒DNA提取试剂盒

简要描述:货  号:D0001
名  称:质粒DNA提取试剂盒
规  格:100T/500T
价  格:120/480

产品型号:

所属分类:其他自产即用试剂

更新时间:2016-12-22

厂商性质:经销商

详情先容

质粒DNA提取试剂盒

试剂盒组成

100T

500T

保存温度

RNaseA(10mg/ml)

400ul

2ml

-20℃

溶液Ⅰ

15ml

75ml

RT

溶液Ⅱ

15ml

75ml

RT

溶液Ⅲ

15ml

75ml

RT

玻璃奶

5ml

25ml

RT

TE缓冲液

15ml

75ml

RT

 

质粒DNA提取试剂盒原理概况
本试剂盒是在经典的质粒提取方法上改进而来,利用玻璃奶吸附质粒,代替有毒的酚氯Fang抽提,得到的DNA可用于常规下游应用实验,但可能并不适用于转染(转染请选去内毒素质量提取试剂盒。本试剂盒(以100T为例)可以用100小次或者5大次提取。

注意事项
1.溶液Ⅱ低温时可能出现析出和沉淀,可以37度水浴几分钟即可恢复澄清透明。用完请及时盖紧盖子。
2.溶液Ⅰ中加入RNaseA后请放2-8度保存,如果长久不用(如一个月),可-20度冻存,或者按照比较分次加入。
3.可根据实验情况中量或者大量提取,加入的试剂等比放大。

操作步骤(以小量提取为例,中提或者大提可等比例加入)
在溶液Ⅰ中加入RNaseA,混匀,2-8度保存。
1.取过ye菌1-5毫升,5000g离心1分钟收集细菌沉淀,弃上清(可重复多次收集于一管中,收集量可考虑菌液浓度与质粒拷贝数),如为阳性细菌,可加入100mg/ml的溶菌酶悬浮菌液,37度处理30分钟,离心,收集沉淀。
2.在收集的菌液中,加入150ul溶液I,重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开,无可见细菌团块(可vortex 5-10秒或更长时间)。室温放置2-3分钟。
3.每管加入150ul溶液Ⅱ(如有沉淀,可37度水浴),轻轻颠倒离心管4-6次,使细菌完全裂解,溶液透明。放置2-3分钟,不过超过5分钟。但也不要混匀后立即加入溶液Ⅲ。
4.放置2-3分钟后,每管加入150ul溶液III,随即颠倒离心管4-6次混匀,可见白色絮状物产生。
5.zui高速(13,000rpm左右)室温离心5分钟。
6.将上清转移到新的离心管中,如有沉淀,可再次离心。
7.玻璃奶摇匀。
8.在第6步的上清中加入50ul混匀的玻璃奶,混匀。室温放置5分钟,期间颠倒2次。
9.10000转/分钟离心1分钟,倒掉上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,70%乙醇重复洗一次,再用无水乙醇洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
7.室温放置10分钟(如果为大提,请延长放置时间到30分钟,此步为去除残余酒精,以免影响下游实验),加入50-100ulTE缓冲液混匀溶解,55℃水浴5分钟。离心,取上清转移到一新的离心管中。此为所提质粒。
8.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。



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