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全血基因组DNA提取试剂盒

全血基因组DNA提取试剂盒

简要描述:货  号:D0024
名  称:全血基因组DNA提取试剂盒
规  格:50T/200T
价  格:360.00/1180.00

产品型号:

所属分类:其他自产即用试剂

更新时间:2016-12-22

厂商性质:经销商

详情先容

全血基因组DNA提取试剂盒

 

试剂盒组成

50T

200T

保存温度

RNaseA10mg/ml

500ul

2ml

-20

蛋白酶K10mg/ml

500ul

2ml

-20

红细胞裂解液(10×)

30ml

120ml

RT

裂解液

12.5ml

50ml

RT

结合液

25ml

100ml

RT

玻璃奶

2.5

10ml

RT

TE缓冲液

10ml

30ml

RT

 

全血基因组DNA提取试剂盒原理概况
本试剂盒适用于各种动物抗凝全血样本,用于从中提取基因组DNA独特的裂解缓冲液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物质,并利用玻璃奶吸附DNA,进一步的去掉其他杂质,提取出来,得到的DNA可用于PCR/Real time-PCRsequencingSouthern blotmutant analysisSNP 等下游应用实验。

注意事项
1.裂解液低温时可能出现析出和沉淀,可以在热水中温浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3.
RNaseA经常使用可放28度保存,蛋白酶K请放-20度保存。
4.同一样本,如果想大量提取,可以增加样本量,并且每一步试剂加量,但使用次数会成倍减少。

操作步骤
在合适的容器中,用双蒸水将红细胞裂解液(10×)稀释成1×。即10ml溶液中加入90ml双蒸水混匀。
1.取不超过500ul抗凝血,加入三倍体积的稀释过的红细胞裂解液,混匀。放置2分钟,12000rpm离心1分钟。去上清。再加入2倍体积的红细胞裂解液,用移液器轻轻吹打沉淀,充分混匀,离心,弃上清,沉淀为白细胞。如果血液为家擒类动物,因为红细胞有核,所以可以省去此步,但加入的样品量不要超过50ul,直接进入下一步。
2.加入250ul裂解液,加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
3.加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液,颠倒混匀,65℃放置10-30分钟,期间颠倒3-5次,小心内心管盖受热开启。如30分钟沉淀无法完全消失,请注意第6步处理。
4,在上清中加入三倍体积无水乙醇,充分混匀。
5.12000rpm离心5分钟,吸去上清,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul结合液,65℃水浴1-2分钟,核酸沉淀可溶解(如无法完全溶解,可转移上清到一新的离心管中,弃沉淀)。
6.玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶,混匀,室温放置2分钟,10000转/分钟离心1分钟,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,70%乙醇重复洗一次,再用无水乙醇洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
7.室温放置10分钟(如果玻璃奶加量,请适当延长放置时间,此步为去除残余酒精,以免影响下游实验),加入50-100ul TE缓冲液混匀溶解,65℃水浴5分钟。离心,取上清为所提基因组。
8.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。



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