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SYBR Green II(10000×)

SYBR Green II(10000×)

简要描述:货  号:R0028
名  称:SYBR Green II(10000×)
规  格:100ul
价  格:460.00

产品型号:

所属分类:其他自产即用试剂

更新时间:2016-12-23

厂商性质:经销商

详情先容

SYBR Green II(10000×)

SYBR Green II RNA染料是一种高敏感的核酸染色试剂,可以对RNA或者是单链的DNA进行染色。使用300nm透射光显影的情况下,非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到5×10-7克。与传统的EB染料相比SYBR Green II RNA染料的灵敏度更高,可以应用于杂交前RNA质量的检测,同时不会影响后续的转膜,还可应用于变形梯度凝胶电泳(DGGE)和单链构象多态性分析(SSCP)等实验。SYBR Green II RNA染料可以代替银染和EB染色,消除了银染复杂、费时的缺点;与EB染色相比,形成的SRBR Green II -RNA复合物所激发的荧光是EB-RNA复合物激发荧光的7倍。SYBR Green II RNA染料并不是特异性的结合RNA或者DNA单链,但是其对单链的结合效率是双链的约2倍,广泛的应用于RNA的质量分析中。

染色方法:

SYBR Green II RNA 染料检测核酸时即可预染也可以电泳后再进行染色。做预染使用时,取1ul贮存液加入1ml TE缓冲液或者灭菌双蒸水中混匀,再加入1ml 的6-loading buffer上样缓冲液混匀(此时溶液为1:2000稀释,即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后直接上样。注意:须将商品化的核酸MARKER作一定倍数的稀释(1/5-1/10),这样才能得到比较理想的结果。

电泳后染色。电泳后,在室温、避光的情况之下准备染色液。染色液要在塑料器皿中制备而不要在玻璃器皿中,因为玻璃表层对该试剂有吸附作用。

染料取出后室温放置,恢复室温后简单离心混匀。

染色液使用1×TBE缓冲液进行1:10,000稀释。如果是琼脂糖甲醛变性胶,用1×TBE做1:5,000的稀释。由于SYBR Green II RNA染色液灵敏度高,所以要选用新鲜的1×TBE缓冲液进行稀释,以免缓冲液中残存的杂质产生背景,影响实验结果。注意:为了提高染色的灵敏度,要确定缓冲液的PH值在7.5和8之间,因为SYBR Green II RNA染色液对PH敏感。

把胶放在塑料的染色容器中,加入足够染色液使之覆盖整块胶。用铝箔遮盖或者是放在暗处避光。在染色之前没有必要先将胶中的变性剂如尿素和甲醛洗出来,因为SYBR Green II RNA染色液复合物发出的荧光在甲醛或者尿素存在时不会猝灭。

在室温下轻轻摇晃凝胶。聚丙烯酰胺凝胶的*染色时间是10-40分钟,琼脂糖凝胶的*染色时间是20-40分钟。染色时间也可能随着凝胶的厚度和浓度变化。由于其荧光本底很低,凝胶染色后无需脱色。染色工作放在2-8°C避光保存,可以重复使用3-4次。注意:SYBR Green II RNA染色液不影响RNA向膜上的转移和northern中的后续实验。

染色胶显色和成像:SYBR Green II RNA染色液复合物所激发的荧光可以使用300nm和254nm光波照射,通过Wratten 15 滤光片检测。注意:由于荧光本底较低,所以可以通过适当延长曝光时间的方法检测痕量的核酸。

请带手套操作。

贮存

SYBR Green II RNA染色液保存于DMSO溶液中,此贮存液于保存温度为-20°C,放置于避光干燥器中,在以上条件下,可在保存一年。稀释工作液在2-8°C可以放置一周,在室温放置3-4天。



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