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通用RT-PCR试剂盒(两步法M-MLV)

通用RT-PCR试剂盒(两步法M-MLV)

简要描述:货  号:R0010
名  称:通用RT-PCR试剂盒(两步法M-MLV)
规  格:50T/100T
价  格:1300.00/2400.00

产品型号:

所属分类:其他自产即用试剂

更新时间:2016-12-23

厂商性质:经销商

详情先容

通用RT-PCR试剂盒(两步法M-MLV)

 

试剂盒组成:

试剂盒组成

50

100

储存条件

 M-MLV(200U/ul)

50ul

50ul×2

-20

5×M-MLV Buffer

200ul

400ul

-20

Oligo(dT)16(10uM)

100ul

200ul

-20

Random(N)6(10uM)

100ul

200ul

-20

RNasin(40U/ul)

25ul

50ul

-20

dNTPs(10mM)

100ul

200ul

-20

Taq Polymerase(5U/ul)

25ul

50ul

-20

10×PCR Buffer

250ul

500ul

-20

MgCl2(25mM)

200ul

400ul

-20

RNase-free ddH2O

1ml

1ml×2

-20

说明书

1

1

RT

5×M-MLV Buffer10×PCR BufferMgCl2(25mM)RNase-free ddH2O2-8保存一个月对实验无影响,Oligo(dT)16(10uM)Random(N)6(10uM)dNTPs(10mM)2-8保存一周对实验无影响,为了你的实验方便和试剂的稳定性,请自行决定试剂存放温度。试剂解冻后请混匀离心后再使用。微量试剂打盖前请离心。

产品概况:

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应,能够获得较长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。

本产品配有两种引物,一种为Oligo(dT),另一种为随机引物(Random),如果用Oligo(dT)无法得到想要的结果,可以用随机引物(Random)试一下。

 操作步骤:

一、反转录反应

1、在冰浴的无RNase的离心管(或者PCR管)中加入如下反应成分:
1-5ugRNA50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT)162ul Random(N)6或者2 pmole基因特异性引物
RNase-free ddH2O13.5ul

270保温5min后迅速在冰上冷却2min,简短离心收集反应液后加入以下各组分:
4ul   5×M-MLV Buffer
1ul   dNTPs

0.5ul  Rnasin
1ul   M-MLV

342温浴60min,如果是用随机引物,请先将离心管25温浴10min,再42温浴60min

495加热5min终止反应,置冰上进行后续实验或-20保存。

5、用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50ul,取2-5ul进行PCR反应。

 

二、PCR反应

1、按以下各组分配制50ul PCR反应体系:
10×PCR Buffer             5ul
MgCl                    4ul
dNTPs                    1ul

上游引物用户自备
下游引物用户自备
RT反应产物               2ul
Taq Polymerase            0.5ul
ddH2O                    x ul
Total Volume              
50ul

2、简短离心,上PCR仪扩增,琼脂糖观察结果。

 

注意事项:

1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理,并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时,首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行过滤除菌处理。

2、试剂盒的各组分应避免反复冻融,有效期12个月。

3、RNA样品要避免反复多次冻融,应使RNA在冰浴中处于融化状态。



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